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Protein A /G/ L介紹和抗體純化示例

案例展示1：AT ProteinA Sanarose 4FF耐堿性測試

♦ 材料與方法：

填料批號(hào)：AT ProteinA Sanarose 4FF 批號(hào)20230331;

測試載量樣品：人IgG;

層析柱：1mL預(yù)裝柱;

♦ 緩沖液

清洗液：0.5M NaOH;

緩沖液A：20mM 磷酸二氫鈉，150mM NaCl，pH7.4;

緩沖液B：0.1 M 檸檬酸鈉，pH3.0;

中和緩沖液：1M Tris-Cl，pH9.0

♦ 程序運(yùn)行

 

0.5M NaOH，15CV，1mL/min

↓

水洗，10CV，1mL/min

↓

緩沖液A平衡，10CV，1mL/min

↓

緩沖液B洗脫，10CV，1mL/min

分別在循環(huán)0、10、20、30、40、50、65、75、105、155、197、212、242、250次后測定動(dòng)態(tài)載量;

♦ 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

如下圖所示，用0.5 M NaOH在線清洗層析介質(zhì)AT ProteinA Sanarose 4FF，單次清洗接觸時(shí)間15min，250次循環(huán)后(清洗時(shí)間3750min，62.5hr)剩余結(jié)合載量為初始載量的89%。通過本實(shí)驗(yàn)，說明AT ProteinA Sanarose 4FF具有較強(qiáng)的耐堿能力，對(duì)于大規(guī)模純化中層析介質(zhì)的清潔至關(guān)重要。

圖3 AT ProteinA Sanarose 4FF 0.5M NaOH清洗次數(shù)與載量變化關(guān)系

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案例展示2：利用AT ProteinA Sanarose 4FF純化小鼠血清

♦ 物料信息

樣品信息：2mL 小鼠腹水(鼠源 IgG);

填料批號(hào)：AT ProteinA Sanarose 4FF 批號(hào)20230331;

層析柱：1mL預(yù)裝柱;

♦ 緩沖體系

平衡液：1*PBS，pH7.4;

洗脫液：10mM NaAc-HAc，pH3.5;

中和液：1M Tris，pH9.0;

♦  程序運(yùn)行

緩沖液A平衡，10CV，1mL/min

↓

上樣，0.2 mL/min

↓

緩沖液A平衡，10CV，1mL/min

↓

緩沖液B洗脫，10CV，1mL/min，收集目的蛋白

↓

SDS-PAGE純化結(jié)果檢測

♦ SDS-PAGE純化結(jié)果檢測

圖4 AT ProteinA Sanarose 4FF純化小鼠血清

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結(jié)論：從純化結(jié)果上看，AT Protein A Sanarose 4FF 純化效果優(yōu)于競品(LXPA)。